瓜类果斑病菌PCR检测试剂盒
货号：EQUL-PCR1
规格：Kit AAC.PCR.50T
报价：价格面议
商品描述
1. 产品说明 试剂盒组成 150T包装规格 2 x Premix Solution 1ml x5 primer Mix AAC（10μM） 200ul Positive control DNA AAC(50ng/μL) 100ul
Acidovorax avenae subsp. Citrulli(A.A.C) PCR检测试剂盒依据基因数据库建立的一种PCR检测方法，用于检测Acidovorax avenae subsp. Citrulli病毒，PCR能扩增到一条特异性条带，扩增时间约1小时。
2. 保存条件
-20℃保存
3. 产品内容（150次）
4. 操作流程
4.1 DNA制备
许多生物制品公司可提供基因组提取试剂盒，DNA制备方法请参考相关制品说明书。
4.2 扩增
-根据需检测的样品数量准备PCR管，包括对照管
-按下表所列依次加入以下组分：
组分 | 用量 |
2× Premix Solution | 25μL |
AAC primer Mix | 2μL |
Template DNA or control DNA ddH2O | 1μL 22μL |
Total | 50μL |
-如果PCR仪没有热盖，请在PCR反应液里加一滴矿物油。
-按以下条件进行PCR反应
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
变性 | 94℃ | 3 minutes | 1× |
变性 | 94℃ | 30 seconds | 30× |
退火 | 68℃ | 30 seconds | |
延伸 | |||
延伸 | 72℃ | 5 minutes | 1× |
注意：以上操作请在冰上进行。
4.3 PCR产物的电泳检测
-制备1.5%的琼脂糖凝胶。
-取10μLPCR产物，适量（参考marker说明书）DNA marker加入到样品孔，进行电泳。
-凝胶成像系统下观察DNA条带，目的条带的大小为442bp（如图1所示）。
5. 注意事项
•本产品仅用于研究。
•仅供体外使用。
6. 样本处理
6.1 取待检疑含果斑病菌的瓜种用水或PBST 或MOPS 浸泡，放在匀速震荡器上过夜；
6.2 取40ul 浸提液（取样前振荡混匀10 秒钟）于离心管（未提供）中，加入等量DNA 提取液（提取液内含不溶于水的物质，取样时需用加样器充分混匀后吸取），充分混匀；
6.3 95℃-100℃水浴10 分钟，然后冷却至室温；
注：水浴过程中离心管由于受热，盖子可能会弹开，所以要在操作过程中注意观察。
6.4 以>10,000rpm 的转速离心5 分钟，取上清液作为反应模板；
6.5 处理后的样本应尽快使用，或将上清吸出后保存于－20℃～－80℃，最长不超过1 个月（不宜反复冻融）。
注：阳性对照不需处理，可直接使用。
DNA提取液即是抽提基因组DNA的Buffer，我们这个试剂盒里没有提供。