鸡毒支原体抗体检测试剂盒

MP-AB-96 鸡毒支原体抗体检测试剂盒
使用说明书

【介绍】
鸡毒支原体抗体检测试剂盒检测鸡血清中的鸡毒支原体抗体，用于评估养鸡场鸡毒支原体疫苗免疫状况及感染鸡的血清学辅助诊断。
本试剂盒采用间接ELISA法，在酶标微孔上预包被鸡毒支原体抗原。在试验中，加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有鸡毒支原体特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB底物液，经酶催化形成蓝色产物，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
【组份】
1 抗原预包被板条 1块 7 终止液 6ml
2 酶结合物 12ml 8 阴性对照 0.8ml
3 10倍浓缩洗涤液 50ml 9 阳性对照 0.8ml
4 底物A液 6ml 10 血清稀释板 1块
5 底物B液 6ml 11 封板膜 2张
6 样本稀释液 50ml 12 说明书 1份
【需自备的设备及试剂】
1. 微量移液器： 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸头。
3. 量筒：500ml。
4. 96孔板酶标仪。
5. 蒸馏水或去离子水。
6. 洗瓶或洗板机。
【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液的准备】
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
【样品的稀释】
在血清稀释板中按1：99的体积比稀释待检血清（例如：495μl样品稀释液中加5μl待检血清）。
注意：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。
【注意事项】
1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。
2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
4. TMB（底物B液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2～8℃)。
6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
8. 血清稀释板为一次性用品，不得重复使用；血清稀释板的最大容量为300μl/孔。
【操作步骤】
1. 取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性、阳性及空白对照各1孔，取阴性及阳性对照各100μl
分别加入反应孔中，空白对照仅加入100μl样本稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出）。
2. 盖上封板膜，置37℃温育30分钟。
3. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，加满液体后停留1分钟，后甩去孔内液体，以上步骤重复3次，最后在干净吸水纸上拍干。
4. 每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30分钟。
5. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤3次, 方法同3。切记最后在干净吸水纸上拍干。
6. 每孔先加底物液50µl、再加显色液50µl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。
7. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。
【结果判定】
以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度A值。试验成立的条件是阳性对照孔A450值大于或等于0.6，阴性对照孔A450值必须小于0.15。如果试验无效，试验中的操作值得怀疑，试验应重做，并仔细检察各组分。
样品A450值大于0.25+阴性对照孔均值，判为阳性；样品A450值小于0.25+阴性对照孔均值，判为阴性；如阴性对照孔均值小于0.05按0.05计算。
【有效期】
贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。
有效期： 12个月。